煙臺CO2培養(yǎng)箱HH.CP-T二氧化碳箱如何用二氧化碳培養(yǎng)箱進行細胞復(fù)蘇、傳代及凍存實驗一  復(fù)蘇 傳代

（1） 準(zhǔn)備

   無菌超凈臺，酒精燈，75%酒精噴壺，二氧化碳培養(yǎng)箱，37℃水浴鍋，離心機；培養(yǎng)瓶，含10%胎牛清的*培養(yǎng)基和基礎(chǔ)培養(yǎng)基以及PBS磷酸緩沖液（提前放置超凈臺使平衡到室溫），無菌工作服（白大褂），口罩，手套，記號筆

（2） 步驟

   1.穿好無菌工作服，帶上口罩和手套，快速從液氮里取出凍存管，快速放進37℃水浴鍋緩慢搖晃使細胞解凍，注意凍存管的封口膜不要破裂，防止污染。

   2.解凍后用紙擦干凍存管表面的水滴，酒精噴壺噴灑適量75%酒精消毒凍存管封口處。

   3.開超凈臺，點燃酒精燈燃燒片刻后（可提前準(zhǔn)備），凍存管放超凈臺，換新手套，小心打開凍存管，避免污染，無菌吸管將1ml細胞全部吸出至5ml無菌EP管，補加9ml基礎(chǔ)培養(yǎng)基稀釋，1000rpm，離心5min使細胞沉淀，棄上清。

   4.加入新鮮配制的含10%清的培養(yǎng)基4ml，輕輕混勻，用吸管將細胞移至25T培養(yǎng)瓶。

   5.平躺放置培養(yǎng)瓶，8字形混勻后，置于37℃，5%二氧化碳培養(yǎng)箱培養(yǎng)。

   6.培養(yǎng)24小時后，顯微鏡觀察細胞（貼壁細胞）貼壁后，小心更換培養(yǎng)基，根據(jù)不同細胞的生長狀態(tài)進行傳代培養(yǎng)，培養(yǎng)瓶上標(biāo)記：操作者，時間，細胞類型。

煙臺CO2培養(yǎng)箱HH.CP-T二氧化碳箱技術(shù)參數(shù):

推薦的二氧化碳培養(yǎng)箱使用注意事項

　　1、二氧化碳培養(yǎng)箱未注水前不能打開電源開關(guān)，否則會損壞加熱元件。

　　2、培養(yǎng)箱運行數(shù)月后，水箱內(nèi)的水因揮發(fā)可能減少，當(dāng)?shù)退恢甘緹簦╓Low12）亮?xí)r應(yīng)補充加水。先打開溢水管，用漏斗接橡膠管從注水孔補充加水使低水位指示燈熄滅，再計量補充加水（CP-ST200A加水1800ml，CP-ST100A加水1200ml），然后堵塞溢水孔。

　　3、二氧化碳培養(yǎng)箱可以做高精度恒溫培養(yǎng)箱使用，這時須關(guān)閉CO2控制系統(tǒng)。

　　4、因為CO2傳感器是在飽和濕度下校正的，因此加濕盤必須時刻裝有滅菌水。

　　5、當(dāng)顯示溫度超過置定溫度1℃時，超溫報警指示燈（OverTemp7）亮，并發(fā)出尖銳報警聲，這時應(yīng)關(guān)閉電源30分鐘;若再打開電源（溫控）開關(guān)（Power20）仍然超溫，則應(yīng)關(guān)閉電源并報維修人員。

　　6、鋼瓶壓力低于0.2MPa時應(yīng)更換鋼瓶。

　　7、盡量減少打開玻璃門的時間。

　　8、如果二氧化碳培養(yǎng)箱長時間不用，關(guān)閉前必須清除工作室內(nèi)水分，打開玻璃門通風(fēng)24小時后再關(guān)閉。

　　9、清潔二氧化碳培養(yǎng)箱工作室時，不要碰撞傳感器和攪拌電機風(fēng)輪等部件。

　　10、拆裝工作室內(nèi)支架護罩，必須使用隨機扳手，不得過度用力。

　　11、搬運培養(yǎng)箱前必須排除箱體內(nèi)的水。排水時，將橡膠管緊套在出水孔上，使管口低于儀器，輕輕吸一口，放下水管，水即虹吸流出。

　　12、搬運二氧化碳培養(yǎng)箱前應(yīng)拿出工作室內(nèi)的擱板和加濕盤，防止碰撞損壞玻璃門。

　　13、搬運培養(yǎng)箱時不能倒置，同時一定不要抬箱門，以免門變形。

         二氧化碳培養(yǎng)箱是免疫學(xué)、腫瘤學(xué)、遺傳學(xué)及生物工程所必須的關(guān)鍵設(shè)備，廣泛應(yīng)用于微生物、農(nóng)業(yè)科學(xué)、藥物學(xué)的研究和生產(chǎn)。